這是達(dá)醫(yī)曉護(hù)的第5792篇文章

我說我是搞病理診斷的，你一臉疑惑！

我解釋說就是顯微鏡下看片的，你哦了一聲，然后問是不是和看影像膠片一樣，黑白灰?guī)讉€色度來判斷疾病？

我說不是，病理的色彩可豐富了，打個比喻：你可以把影像色彩想象成老式黑白電視呈現(xiàn)的畫面效果，那病理色彩就是彩色電視機(jī)呈現(xiàn)的畫面效果，不信給你看幾張圖片：

怎么樣？“五顏六色”用來形容不足為過吧！顯微鏡下病理色彩可豐富了。

當(dāng)然不同色彩，需要不同的染色方法。

今天就給大家介紹病理科最常見的染色方法-HE染色。

蘇木素-伊紅染色（HE染色）是組織學(xué)和病理學(xué)中最常用的染色方法，其原理基于細(xì)胞內(nèi)不同成分的化學(xué)性質(zhì)與染料的結(jié)合。

1. 細(xì)胞核染色原理

蘇木素的作用

蘇木素是一種堿性染料，經(jīng)媒染劑處理后攜帶正電荷。細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)主要成分是DNA，DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中磷酸基向外，使外側(cè)帶負(fù)電荷，呈酸性。蘇木素的正電荷與DNA的負(fù)電荷通過離子鍵或氫鍵結(jié)合，形成帶正電荷的復(fù)合物。在堿性環(huán)境下，該復(fù)合物被氧化為藍(lán)色的蘇木紅，從而使細(xì)胞核染成藍(lán)色。（下圖示皮膚、腸黏膜組織）

相關(guān)結(jié)構(gòu)染色

除細(xì)胞核外，鈣鹽、軟骨、黏液等也因含酸性物質(zhì)，能與蘇木素結(jié)合而呈藍(lán)色或紫藍(lán)色。（下圖示軟骨、病變鈣化組織）

2. 細(xì)胞質(zhì)染色原理

伊紅的作用

伊紅是酸性染料，在水中解離為帶負(fù)電荷的陰離子。細(xì)胞質(zhì)的主要成分是蛋白質(zhì)，為兩性化合物。當(dāng)染液pH調(diào)至蛋白質(zhì)等電點(diǎn)（4.7-5.0）以下時，蛋白質(zhì)帶正電荷，可與伊紅的負(fù)電荷陰離子結(jié)合，使細(xì)胞質(zhì)染成紅色或粉紅色。（下圖示肝組織、肌肉組織）

其他成分染色

紅細(xì)胞、肌肉、結(jié)締組織、嗜伊紅顆粒等因含堿性物質(zhì)，也能被伊紅染成不同程度的紅色。（下圖示小血管內(nèi)紅細(xì)胞、骨骼肌組織）

3. 染色過程中的關(guān)鍵步驟

分化作用

染色后用鹽酸酒精等分化液處理，去除細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中過多結(jié)合的蘇木素，使細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)染色更分明。

返藍(lán)作用

分化后細(xì)胞核呈紅色，需用弱堿性溶液（如氨水、碳酸鋰溶液）使蘇木素恢復(fù)為藍(lán)色，增強(qiáng)細(xì)胞核的染色效果。

通過蘇木素染細(xì)胞核為藍(lán)色、伊紅染細(xì)胞質(zhì)為紅色，形成鮮明對比，便于觀察細(xì)胞和組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，是HE染色的核心原理。（下圖示乳腺、橫紋肌組織）

具體染色步驟如下

1、石蠟切片脫蠟至水，冰凍切片晾干即可；

2、切片入蘇木素染色3-5min，水洗，鹽酸水溶液分化約3s，自來水洗，氨水返藍(lán)約3s，自來水洗；

3、鏡檢細(xì)胞核呈淡藍(lán)色至藍(lán)色（由不同組織決定），背景淡藍(lán)色或者近乎無色；

4、切片依次入85%和95%乙醇脫水各4分鐘，入伊紅染液4-5min，三缸無水乙醇脫水，每缸4-5min，正丁醇透明4-5min，兩缸二甲苯透明，每缸2-4min；

5、切片轉(zhuǎn)入盛有干凈二甲苯的方缸中，中性樹膠封片。

結(jié)果判讀

細(xì)胞核呈藍(lán)色，軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒深藍(lán)色，粘液灰藍(lán)色，細(xì)胞漿呈深淺不同的粉紅色至桃紅色，胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈鮮紅色，膠原纖維呈淡粉紅色，彈力纖維亮粉紅色，紅細(xì)胞橘紅色，蛋白性粘液粉紅色。（下圖分別示皮膚、胎盤、腸黏膜、血管組織）

當(dāng)然，時代在進(jìn)步，病理診斷閱片都用人工智能了，更別說染色了。現(xiàn)在各醫(yī)院病理科幾乎都沒有手工染色了吧，取而代之的是全自動染色機(jī)，包括染色各個步驟及封片流程，對于大批量的切片染色來說，效率非常高，并且機(jī)染顏色質(zhì)量比手工染更穩(wěn)定。（圖為我科全自動HE染色機(jī)）

作者：川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院

病理科 潘盛蘭

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